使用色氨酸荧光进行溶菌酶的构象分析 | 量子荧光|微型光纤光谱仪-ag贵宾会

前言：

蛋白质内的色氨酸残渣受紫外线激发可产生本征荧光。当蛋白质从折叠的自然状态进入变性状态的时候，发射光谱将轻微变化，反映了折叠构型的变化。

目的：

测定溶菌酶中处于天然态和变性状态色氨酸的本征荧光。

为了进行这个分析，对溶菌酶的天然和变性状态本征荧光进行了测量。溶菌酶为14.3 kda 蛋白质，具有6色氨酸残基。色氨酸的激发波长为280 nm，发射波长350 nm。

实验条件：

下列样品送交分析：

0.5 mg/ml溶菌酶的k2hpo4溶液50 mm，ph值：7.4 -天然蛋白质

0.5 mg/ml溶菌酶的 k2hpo4溶液，ph值：7.4，6 m胍hcl -变性蛋白质

50 mm k2hpo4，ph值：7.4，50 mm k2hpo4，ph值：7.4，6 m胍hcl 

将数毫升的溶菌酶溶液转移到一个石英试管，光程长1 cm。用uv-lvf-l滤光片使激发一侧300 nm以下的光通过。同时对缓冲剂的荧光进行了测量，以确保它们在使用条件下不发出荧光。

使用的硬件：

usb2000 (usb2e4066) 光栅1，uv2/oflv-4探测器，l2透镜，200 um光阑 px2脉动氙灯光源

cuv-fl-da 直插式试管托架

uv-lvf-l uv低通线性可变滤波器

cvd-diffuse

p600-2-uv-vis（紫外线-可见光）

石英试管（cv-q-10）

实验参数：

积分时间（ms）：500

光谱平均值：10

平滑次数：10

测量模式：

荧光

结果：

图1为天然和变性的溶菌酶溶液和缓冲剂测量的荧光光谱。注意：与蛋白质的折叠状态相关的荧光存在轻微的频变。