- 医疗与生命科学
蛋白质内的色氨酸残渣受紫外线激发可产生本征荧光。当蛋白质从折叠的自然状态进入变性状态的时候，发射光谱将轻微变化，反映了折叠构型的变化。
目的：
测定溶菌酶中处于天然态和变性状态色氨酸的本征荧光。
为了进行这个分析，对溶菌酶的天然和变性状态本征荧光进行了测量。溶菌酶为14.3 kda 蛋白质，具有6色氨酸残基。色氨酸的激发波长为280 nm，发射波长350 nm。
实验条件：
下列样品送交分析：
- 0.5 mg/ml溶菌酶的k2hpo4溶液50 mm，ph值：7.4 -天然蛋白质
- 0.5 mg/ml溶菌酶的 k2hpo4溶液，ph值：7.4，6 m胍hcl -变性蛋白质
- 50 mm k2hpo4，ph值：7.4，50 mm k2hpo4，ph值：7.4，6 m胍hcl
将数毫升的溶菌酶溶液转移到一个石英试管，光程长1 cm。用uv-lvf-l滤光片使激发一侧300 nm以下的光通过。同时对缓冲剂的荧光进行了测量，以确保它们在使用条件下不发出荧光。
使用的硬件：
- usb2000 (usb2e4066) 光栅1
- uv2/oflv-4探测器
- l2透镜
- 200 um光阑
- px2脉动氙灯光源
- cuv-fl-da 直插式试管托架
- uv-lvf-l uv低通线性可变滤波器
- cvd-diffuse
- p600-2-uv-vis（紫外线-可见光）
- 石英试管（cv-q-10）
实验参数：
- 积分时间（ms）：500
- 光谱平均值：10
- 平滑次数：10
测量模式：
- 荧光
结果：
图1为天然和变性的溶菌酶溶液和缓冲剂测量的荧光光谱。注意：与蛋白质的折叠状态相关的荧光存在轻微的频变。